flaB重组干酪乳杆菌口服疫苗可增强鲤鱼对气单胞菌的免疫能力|金沙集团网址

01文章背景概述BACKGROUNDINTRODUCTION气单胞菌科是人类、动物和水生生物极其重要的传染性病原体。该病原菌普遍不存在于水生环境中，多数菌株具备较高的致病性，可引发水生动物疾病、造成水产养殖业极大的损失。此外，气单胞菌还不会引发人类呕吐，且目前病例也日益减少，对公共卫生安全性产生了相当严重的问题。

疫苗接种被指出是防治病毒感染的有效地策略。气单胞菌的毒力因子，主要还包括脂多糖（LPS）、外膜蛋白（OMPs）、气溶酶（Aer）、鞭毛蛋白（Fla）等。其中，鞭毛蛋白（fla）是细菌鞭毛的主要成分，主要还包括flaA和flaB，具备较好的免疫原性，可作为血清学检验的基础。

鞭毛蛋白（FlaB）是气单胞菌的多种毒力因子之一，可以作为一种较好的免疫系统抗原，可分开免疫系统宿主，在免疫系统接收者中充分发挥最重要起到，具备辽阔的发展前景。黏膜是外来病原体与鱼类认识时遇上的第一道屏障，而鱼会通过局部免疫反应对机体产生维护起到。

与传统免疫系统比起，黏膜免疫系统不会产生高水平的抗体，反感转录宿主T细胞和应激反应。尤其是粘膜免疫非常适合于动物间大规模传染病的防治。因此，基于黏膜免疫系统制取的口服疫苗是化疗鱼类气单胞菌病毒感染等水生疾病的适合方法。

使用黏膜免疫系统法制取的鱼类口服疫苗比传统的静脉注射疫苗极具优势。乳酸菌作为黏膜免疫系统的较好蛋白传送载体，需要诱导机体产生有效地的免疫系统接收者和免疫耐受，被普遍指出是需要抵抗肠道不当环境并已完成定植和抗原呈现出的疫苗载体。

吉林农业大学动物科学技术学院和河北科技师范大学防治兽医学省级重点实验室的Yi－DiKong，Yuan－HuanKang等人2019年在《FishandShellfishImmunology》杂志上（IF2018＝3．185，农林科学1区）公开发表了为题“OralimmunizationwithrecombinantLactobacilluscaseiexpressingflabconfersprotectionagainstAeromonasveroniichallengeincommoncarp，Cyprinuscarpio”的文章。在本文中，作者研究研发了两种木糖诱导传达系统传达气单胞菌flaB的干酪乳杆菌菌株，并以免疫原性作为疫苗载体诱导鱼对气单胞菌的免疫系统接收者。02所用到的主要方法METHODS1．质粒建构及蛋白传达2．Westernblot3．免疫荧光分析4．ELISA5．白细胞吞噬作用分析6．qRT－PCR03文章主要内容摘要ABSTRACT用SmaI／EcoRV或BamHI／XhoI限制性内托核酸酶消化flaB基因（900bp）的提纯PCR产物，分别放入pPG－1或pPG－2传达载体的适当位点，获得pPG－1－flaB或pPG－2－flaB。

重组的pPG－1－flab和pPG－2－flab经电穿孔转化成进干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）CC16，同时使用含flaB基因（Lc－pPG）的pPG质粒的干酪乳杆菌作为载体对照。实验首先使用Westernblot分析及免疫荧光对重组flaB基因在干酪乳杆菌菌株中的传达情况展开了分析检测。此外，利用PCR和测序技术检验重组干酪乳杆菌，并分析了细胞的生长和遗传稳定性，结果找到重组质粒可以平稳遗传多达50代，外源抗原的传达和黏液对宿主菌细胞生长基本上没过于大的影响。

在口服重组干酪乳杆菌Lc－pPG－1－flaB和Lc－pPG－2－flaB免疫系统鲤鱼后，鱼体内ACP、AKP、LZM、SOD活性减少，血清免疫系统指标强化，免疫系统的组织中IL–10、IL－β、IFN－γ和TNF－α的传达减少。在肠道中需要检测到重组干酪乳杆菌的存活，并且，在用病原菌维隆气单胞菌（Aeromonasveronii）反击宿主时，给与Lc－pPG－1－flaB（66．7％）和Lc－pPG－2－flaB（53．3％）免疫系统组的存活率皆显著低于对照组。

这些结果表明：flaB重组干酪乳杆菌可以定植到鲤鱼的肠道，并增进免疫系统接收者、强化鲤鱼对气单胞菌病毒感染的抗病性，从而产生较强的免疫系统维护起到。

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